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ELISA試劑盒實驗的總結經驗
發布時間:2019/10/16 9:11:46 已瀏覽次數: 68 次

     ELISA試劑盒包被原的性質很重要,蛋白濃度,是不是降解,這聯絡到你做出的抗體可不可以被其辨認,所以保管抗原很重要,我做重組蛋白時,師兄都嚴峻警告我必定要在冰浴下緩慢消融便是這個道理.還有有的包被原可以不是蛋白,關于生物素和脂類物質或小分子物質我們要事前對其改造再加以包被,列出如下:

 
    ①親和素生物素:先親和素先包被載體,參與生物素化的DNA,這種包被辦法均勻 健壯,已擴展應用于各種抗原物質的定量測定.
 
    ②脂類物質:可將其在有機溶劑(例如乙醇)中溶解后參與ELISA板孔中,開蓋置冰箱或冷風吹干,待酒精蒸騰后,讓脂質天然干固在固相表面.
 
    ③小分子有必要依托和大的蛋白載體偶聯后才華固定在固相載體上.
 
    包被液的選擇,一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液.但有時由于試驗的需求,包被原的特殊性也可以選用中性的緩沖溶液來包.應留意以下原理:ELISA試劑盒由于蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附聯絡的,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用,這種物理吸附對錯特異性的,受蛋白質的分子量 等電點 濃度等的影響,大分子蛋白質較小分子蛋白質一般富含更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體表面.具體的試驗還要有穩固的理論外也要實習,看一下結束可不可以應用到自個試驗當中去.常用的包被液除了剛才說到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等.
 
    ELISA試劑盒封閉:繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的進程.封閉便是讓許多不相關的蛋白質充填這些空位,然后架空ELISA后的過程中煩擾物質的再吸附.常有:0.05%-0.5%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉,對比價廉,可以高濃度運用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動物血清(首要為了掃除相似蛋白煩擾)和酪蛋白等等.但結束選用啥,要根據試驗具體來實習.
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